作为一只Cre工具鼠,我是基因工程的产物,专为科学研究而生。我体内携带的Cre重组酶基因,能与另一个伙伴的LoxP位点相互作用,构成Cre-LoxP系统的基础。在实验小鼠族群中,我的核心从业优势在于可以为时空特异性的基因操控需求赋能。
在科研应用上,我总是大显身手:
神经系统探索:当Cre表达被限定在特定神经元亚群时,我帮助研究人员揭示特定脑区或神经回路的功能,以及与神经退行性疾病相关的基因作用机制。
肿瘤学研究:通过协助条件性激活或失活致癌基因,我在模拟人类肿瘤发展、研究肿瘤生物学及测试治疗策略方面发挥着关键作用。
代谢研究:如果需要在特定代谢器官中调控基因,也少不了我的身影,我给肥胖、糖尿病等代谢性疾病的研究提供了重要的体内模型。
现在,我正和我的兄弟姐妹们住在一个个小房子里,什么?你问我们各有什么神通本领?不如直接来看看我们的登记名录:
赛业生物工具鼠列表(精选)
Cre工具鼠
Cre工具鼠&荧光标记模型
诱导型Cre工具鼠
诱导型Cre工具鼠&荧光标记模型
Dre工具鼠
其他
模型验证——以Cyp19a1-IRES-Cre小鼠为例
将Cyp19a1-IRES-Cre小鼠与Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配,产生双基因杂合子代小鼠,Cre酶介导的重组将导致tdTomato蛋白在子代Cre阳性细胞中表达。分别采集6周龄子代小鼠的卵巢、睾丸和脑组织,通过免疫荧光染色观察Cre重组酶的表达情况。其基因型为——实验组(Cre+):Cyp19a1-IRES-Cre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+];对照组(Cre-):Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]。
Cre重组酶在雌性生殖腺中的表达情况
图1 雌性小鼠卵巢免疫荧光染色[1]
Cre+(Cyp19a1-IRES-Cre[KI/+]; Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+])雌性小鼠在卵巢颗粒细胞中存在大量的tdTomato蛋白红色荧光,表明在该部位存在大量的Cre重组酶表达,而对照组(Cre-)小鼠中检测不到tdTomato红色荧光的表达,不存在Cre重组酶的表达。
Cre重组酶在雄性生殖腺中的表达情况
图2 雄性小鼠睾丸免疫荧光染色[1]
Cre+(Cyp19a1-IRES-Cre[KI/+]; Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+])雄性小鼠在少量睾丸细胞中存在红色荧光,其定位与DAPI部分重合,表明这些细胞可能为睾丸支持细胞或其他类型细胞;而对照组(Cre-)小鼠中检测不到tdTomato红色荧光的表达,不存在Cre重组酶的表达。
Cre重组酶在脑海马区的表达情况
图3 脑部海马区免疫荧光染色[1]
Cre+(Cyp19a1-IRES-Cre[KI/+]; Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+])小鼠在海马CA区域结构(图中白色框内位置)中存在部分的红色荧光,显示在此类区域中Cre发生重组;而对照组(Cre-)小鼠中检测不到tdTomato红色荧光的表达,不存在Cre重组酶的表达。(海马CA区:Hippocamp formation-CA,包括CA1和CA2)
Cre重组酶在脑室、纤维束和脑核区域的表达情况
图4 脑室、纤维束和脑核免疫荧光染色[1]
Cre+(Cyp19a1-IRES-Cre[KI/+]; Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+])小鼠在侧脑室、终纹、尾壳核结构中存在部分的红色荧光,显示在此类区域中Cre发生重组;而对照组(Cre-)小鼠中检测不到tdTomato红色荧光的表达,不存在Cre重组酶的表达。(纤维束区域:终纹-Stria terminalis,图中左侧箭头所示部位;脑室区域:脑侧脑室-Lateral ventricle,图中中间箭头所示部位;脑核区域:尾壳核-Caudoputamen,图中右侧箭头所示部位)
总结
Cyp19a1-IRES-Cre小鼠模型中Cre重组酶的表达主要定位于卵巢颗粒细胞中,同时也可以在脑部的海马区、脑室、纤维束和脑核中的部分细胞中发生由Cre重组酶介导的重组,Cre重组酶的表达与小鼠内源性Cyp19a1基因的表达模式相似,具有良好的特异性。
来源:赛业生物
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